文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

    1.1.1 细胞

    1.1.2 主要试剂和仪器

1.2 方法

    1.2.1 细胞培养

    1.2.2 细胞饥饿及缺氧处理

    1.2.3 实验分组

    1.2.4 荧光定量PCR检测TLR9的mRNA表达水平

    1.2.5 Western blot检测蛋白表达量

    1.2.6 MTT法检测细胞活率

    1.2.7 小干扰RNA转染RPASMCs

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 缺氧上调TLR9蛋白表达和JNK磷酸化水平、促进RPASMCs增殖

2.2 敲低TLR9下调JNK磷酸化水平，抑制缺氧时RPASMCs的增殖

2.3 TLR9激动剂增加JNK磷酸化，促进缺氧时RPASMCs的增殖

2.4 JNK抑制剂SP600125抑制缺氧时RPASMCs的增殖

2.5 JNK抑制剂SP6001265抑制TLR9激动剂对RPASMCs的促增殖作用

3 讨论

文章摘要:目的研究Toll样受体-9（toll-like receptor 9,TLR9）在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞（rat pulmonary artery smooth muscle cells, RPASMCs）增殖中的作用及机制。方法采用MTT、Western blot、PCR法检测RPASMCs的相对增殖水平、蛋白表达水平、mRNA转录水平。（1）3%O₂,36 h处理RPASMCs,构建缺氧诱导RPASMCs增殖的细胞模型,检测细胞相对增殖水平、TLR9、磷酸化c-jun氨基末端激酶（phosphorylated c-jun N-terminal kinase, p-JNK）蛋白表达水平。（2）缺氧条件下分别使用小干扰RNA序列（small interfering RNA sequence, siRNA）或20μmol/L TLR9激动剂ODN 1826敲低或活化TLR9,检测RPASMCs的细胞增殖水平和c-jun氨基末端激酶（c-jun N-terminal kinase, JNK）磷酸化水平。（3）缺氧时使用5μmol/L JNK抑制剂SP600125处理RPASMCs,检测缺氧条件下细胞相对增殖水平。（4）缺氧时复合使用20μmol/L TLR9激动剂ODN 1826和5μmol/L JNK抑制剂SP600125处理RPASMCs,检测RPASMCs的JNK磷酸化水平和相对增殖水平。结果缺氧组RPASMCs的相对增殖水平[（1.30±0.07）,P<0.01]以及TLR9蛋白水平[（1.70±0.22）,P<0.05]和JNK磷酸化[（1.83±0.18）,P<0.01]都显著高于常氧组。敲低TLR9显著抑制缺氧诱导的RPASMC增殖[（0.64±0.09）,P<0.01]并减少JNK磷酸化[（0.49±0.01）,P<0.001]。TLR9激动剂显著促进RPASMCs增殖[（2.01±0.08）,P<0.001]且增加JNK的磷酸化[（2.11±0.33）,P<0.01]。JNK抑制剂抑制RPASMCs增殖[（0.70±0.06）,P<0.05]。与缺氧+TLR9激动剂组相比,缺氧+TLR9激动剂+JNK抑制剂组RPASMCs JNK磷酸化[（0.82±0.14）vs（1.59±0.30）,P<0.001]和相对增殖水平[（1.08±0.05）vs（1.35±0.02）,P<0.001]都显著降低。结论缺氧时TLR9通过激活JNK通路促进大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖。

文章关键词:

论文作者:徐刚^1,2 黄缄^3,2 

论文DOI:10.16016/j.1000-5404.202107145

论文分类号:R544.1